全自动多肽合成仪操作
全自动多肽合成仪的操作规程
全自动多肽合成仪是基于固相多肽合成（SPPS）技术的自动化设备，广泛应用于药物研发、蛋白质研究等领域。以下是详细的操作步骤和注意事项，帮助您高效、安全地使用设备。
一、实验前准备
1. 检查设备状态
确认设备电源连接正常，触摸屏或控制软件工作正常。
检查液路是否畅通，泵和管路无泄漏。
确认废液瓶已清空，试剂瓶和溶剂瓶的液体充足。
2. 准备试剂与耗材
试剂：
氨基酸：带有保护基团（如Fmoc或Boc）的氨基酸。
活化试剂：HBTU、HATU、DIC等。
去保护试剂：20%哌啶/DMF（Fmoc法）或三氟乙酸（Boc法）。
清洗溶剂：DMF、DCM、乙醇等。
固相载体：
树脂（如Rink Resin），根据多肽序列长度选择合适的量。
耗材：
反应柱或96孔板，一次性管路过滤器。
3. 设置程序
在设备的触摸屏或控制软件中，输入多肽的氨基酸序列。
设置反应参数，包括：
耦联时间（如20分钟）。
去保护时间（如15分钟）。
清洗次数（如每步2-3次）。
确认程序是否匹配实验需求，保存设置。
4. 安装反应柱
将装载树脂的反应柱安装到设备指定位置。
用溶剂（如DMF或DCM）溶胀树脂，确保活性位点充分暴露。
二、多肽合成操作流程
1. 初始化设备
启动仪器，检查液路和泵是否正常运行。
运行清洗程序，用DMF或乙醇预洗设备管路，避免污染。
2. 加载首个氨基酸
将首个氨基酸与树脂共价结合：
加入氨基酸、活化试剂（如HBTU）和溶剂（如DMF）。
设置反应时间（通常10-30分钟）。
清洗：
用DMF或DCM多次清洗，去除未反应的试剂和副产物。
3. 去保护
添加去保护试剂：
Fmoc法：20%哌啶/DMF。
Boc法：三氟乙酸（TFA）。
去保护完成后，用清洗溶剂清洗树脂表面，去除残留试剂。
4. 加载后续氨基酸
重复以下步骤，直至目标多肽链合成完成：
耦联反应：加入下一个氨基酸、活化试剂和溶剂。
清洗：用溶剂多次洗涤。
去保护：去除N端保护基团。
5. 监控反应进程
仪器实时显示每个步骤的反应状态，可手动调整反应时间或试剂量。
三、合成后处理
1. 多肽切割
使用酸性溶液（如95%三氟乙酸/水）将多肽从树脂上切下。
混合切割溶液与树脂，在搅拌条件下反应30分钟至1小时。
2. 收集多肽
将切割溶液过滤，收集含多肽的液体。
用冷乙醇沉淀多肽，离心后收集沉淀。
3. 纯化与检测
纯化：
使用高效液相色谱（HPLC）纯化多肽，去除杂质。
检测：
用质谱仪（MS）检测多肽的分子量。
用HPLC确认多肽纯度。
4. 保存多肽
将纯化后的多肽溶液冻干，存储于-20℃或-80℃。
四、操作后清洁与维护
1. 清洗液路
使用DMF、乙醇或其他清洗液彻底清洗设备管路，避免试剂残留堵塞。
2. 更换耗材
检查并更换过滤器、反应柱和其他易耗部件。
3. 仪器维护
定期校准泵的输液精度。
检查管路和接头是否老化或泄漏，及时更换。
五、注意事项
试剂纯度
确保氨基酸和试剂为高纯度（分析纯或更高），避免杂质影响合成。
清洗步骤
每步反应后必须彻底清洗，防止残留物干扰后续反应。
安全防护
使用有机溶剂和酸性试剂时，佩戴防护手套和护目镜。
在通风柜中操作，防止有毒气体泄漏。
多肽序列管理
多通道合成时，标记每个通道对应的多肽序列，避免混淆。
定期校准
按照厂商建议，定期校准液路和泵系统，确保设备精度。
六、常见问题及解决方法
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 耦联效率低 | 活化试剂失效或氨基酸浓度不足 | 更换活化试剂，检查氨基酸溶液浓度 |
| 液路堵塞 | 试剂残留或树脂颗粒堵塞管路 | 使用清洗液冲洗液路，必要时更换管路 |
| 多肽切割不完全 | 切割试剂浓度不足或反应时间短 | 提高切割试剂浓度，延长反应时间 |
| 样品纯度低 | 清洗不充分或反应条件不足 | 增加清洗次数，优化反应条件 |
| 仪器提示输液异常 | 泵或管路连接松动 | 检查泵和管路连接状态，确保紧密无泄漏 |
总结
全自动多肽合成仪通过高度自动化操作，实现从氨基酸加载到多肽切割的全流程合成。严格按照操作规程，确保试剂和设备的清洁与维护，不仅能提高合成效率，还能获得高纯度、高质量的多肽产物。
