多通道多肽合成仪一般的正确操作规程
多通道多肽合成仪操作规程
多通道多肽合成仪通过多个反应通道同时运行，提高多肽合成的效率和通量。以下是其常规操作规程，涵盖实验前准备、操作流程、注意事项及维护要求。
一、实验前准备
1. 确认设备状态
确保仪器正常运行，所有通道无堵塞或损坏。
检查液路系统是否畅通，泵的输液精度是否达标。
清空废液瓶，补充试剂瓶和清洗溶剂。
2. 准备试剂与耗材
试剂准备：
氨基酸：带有保护基团的氨基酸（如Fmoc-氨基酸或Boc-氨基酸）。
溶剂：DMF（二甲基甲酰胺）、DCM（二氯甲烷）、乙醇。
活化试剂：HBTU、HATU、DIC。
去保护试剂：20%哌啶/DMF或三氟乙酸（Boc法）。
固相载体：
选择合适的树脂（如Rink Resin），根据多肽序列的长度调整树脂用量。
耗材：
准备多通道反应柱或96孔板，过滤器及其他必要耗材。
3. 设置多肽序列
在控制软件中输入目标多肽序列及其合成参数。
对每个通道设置单独的多肽序列或同步运行相同序列。
4. 环境检查
确保实验室通风良好，防止有机溶剂挥发对环境及操作人员的影响。
二、多通道多肽合成流程
1. 树脂加载
将固相载体（树脂）装入反应柱或96孔板的每个通道。
用DMF或DCM溶胀树脂，确保反应活性。
2. 初始化
启动仪器进行液路预冲洗，清除残留气泡和杂质。
检查每个通道的试剂流动情况是否正常。
3. 耦联第一步氨基酸
添加首个氨基酸：
每个通道加入指定氨基酸与活化试剂。
保证足够的反应时间（如10-30分钟）。
清洗：
用DMF或其他溶剂洗去未反应的氨基酸和副产物。
4. 去保护
每个通道添加去保护试剂：
Fmoc法：加入20%哌啶/DMF。
Boc法：加入三氟乙酸。
反应完成后，清洗树脂表面以去除残留试剂。
5. 重复循环
按以下步骤循环直至合成完成：
加入新氨基酸与活化试剂（耦联反应）。
洗涤。
去保护。
再次洗涤。
6. 合成完成
当目标序列完成时，使用去保护试剂清洗通道，确保所有侧链保护基团被去除。
三、多肽脱离与纯化
1. 切割多肽
添加酸性切割试剂（如95%三氟乙酸/水）将多肽从树脂上切下。
每个通道单独收集溶液，避免样品混淆。
2. 多肽纯化
使用高效液相色谱（HPLC）分离多肽。
检测多肽的分子量（如使用质谱仪）和纯度。
四、操作后清洁与维护
1. 清洗液路
用DMF或乙醇清洗每个液路系统，确保无试剂残留。
定期使用清洗试剂（如异丙醇）彻底清理管路。
2. 更换耗材
检查过滤器、反应柱和废液管路，必要时更换。
3. 仪器检查
确认泵的输液精度，校准仪器，确保下次运行准确。
五、注意事项
试剂准备
氨基酸和试剂需避免吸潮，确保纯度。
根据实验需求调整溶剂用量，防止浪费。
样品管理
多通道运行时，标记每个通道对应的样品序列，防止混淆。
确保切割和收集的样品独立存放。
每次操作后清洁设备，定期更换老化部件。
定期校准泵和管路系统。
安全操作
操作有机溶剂和酸性试剂时，佩戴防护手套和护目镜。
使用通风柜减少挥发性试剂的暴露。
六、常见问题及解决方法
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 某通道反应不充分 | 液路堵塞或试剂未充分混合 | 检查液路，冲洗或更换相关管路 |
| 耦联效率低 | 活化试剂失效或氨基酸浓度不足 | 更换新鲜试剂，调整浓度 |
| 样品交叉污染 | 液路未清洁或标记错误 | 加强清洗，确保样品标记清晰 |
| 切割不完全 | 切割试剂浓度或反应时间不足 | 使用更高浓度试剂，延长反应时间 |
| 多肽纯度低 | 清洗不充分或反应条件不佳 | 增加洗涤次数，优化反应参数 |
七、总结
多通道多肽合成仪通过高效、标准化的操作流程，显著提升了多肽合成的通量和质量。正确的操作规程包括精准的试剂准备、合理的参数设置和完善的清洁维护。严格按照规程操作和维护设备，不仅能提高实验效率，还能确保合成多肽的高纯度与高重复性，满足药物研发和基础研究的多样化需求。
