DNA合成仪合成DNA片段时使用的原料主要是磷酰胺单体（Phosphoramidite Monomers），这些单体是化学修饰的核苷酸前体，经过特殊处理以适应固相合成工艺。以下是合成所需的关键原料：

1. 磷酰胺单体

磷酰胺单体是DNA合成的核心原料，由以下部分组成：

• 碱基部分（A、T、C、G）：代表腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）等核苷酸的碱基。

• 保护基团：通常是DMT（4,4'-二甲氧基三苯甲基），用于保护5'-羟基，防止在非预期位置发生化学反应。

• 活化位点：磷酰胺键，通过与前一个核苷酸的3'-羟基形成磷酸二酯键。

2. 固相载体

• 固相载体通常是树脂（Resin Beads），如CPG（Controlled Pore Glass，控制孔径玻璃），它作为DNA链的固定平台，支持化学反应的进行。

• 第一个核苷酸通过其3'-羟基共价绑定到固相载体上。

3. 活化剂

• 用于促进磷酰胺单体的偶联反应。

• 常用的活化剂有：

• 四唑（Tetrazole）

• 5-乙基四唑（5-Ethylthiazole）

• 活化剂与磷酰胺单体结合后形成活化中间体，使其更容易与固相上的DNA链连接。

4. 脱保护试剂

• 用于去除保护基团（如DMT），暴露出5'-羟基，为下一次核苷酸添加做好准备。

• 常用试剂：

• 三氟乙酸（TFA，Trifluoroacetic Acid）

5. 封端试剂

• 用于封端未反应的羟基，防止其在后续步骤中干扰合成。

• 常用试剂：

• 醋酸酐（Acetic Anhydride）

• N-甲基咪唑（NMI）

6. 氧化剂

• 将生成的磷酰胺键氧化为更加稳定的磷酸三酯键。

• 常用试剂：

• 碘溶液（Iodine Solution）

7. 清洗试剂

• 在每个反应步骤后清除未反应的试剂和副产物，确保合成精度。

• 常用溶剂：

• 乙腈（Acetonitrile）

8. 脱载剂

• 用于将合成的DNA链从固相载体上释放，同时去除链上的保护基团。

• 常用试剂：

• 浓氨水（Ammonia Solution）

总结

DNA合成仪合成DNA片段所需的主要原料包括：

1. 磷酰胺单体（A、T、C、G及其修饰版本）。

2. 固相载体（如CPG树脂）。

3. 活化剂（促进偶联反应）。

4. 脱保护试剂（暴露反应位点）。

5. 封端试剂（封闭未反应位点）。

6. 氧化剂（稳定化磷酸三酯键）。

7. 清洗试剂（确保合成过程的纯净）。

8. 脱载剂（释放合成的DNA片段）。

这些化学原料协同作用，确保DNA链的高效、精准合成，满足研究和工业应用需求。