电泳仪的使用方法

电泳仪是一种常用的实验设备，广泛用于核酸、蛋白质等分子的分离与分析。正确使用电泳仪是确保实验结果准确和设备安全的重要前提。以下是电泳仪的详细使用方法，包括准备、操作、结果检测及注意事项。

一、实验前准备

1. 准备实验材料和试剂

• 支持介质：根据实验需求选择琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶。

• 缓冲液：配制合适的缓冲液，如TBE、TAE用于核酸实验，SDS-PAGE缓冲液用于蛋白质电泳。

• 样品和加载缓冲液：将样品与加载缓冲液混合，确保样品清晰可见。

• 染料：核酸实验中常用EB或SYBR Green，蛋白质实验中用考马斯亮蓝染色。

2. 制备凝胶

• 配制凝胶溶液：

• 琼脂糖凝胶：溶解琼脂糖粉末于适当的缓冲液中，加热至完全溶解。

• 聚丙烯酰胺凝胶：按比例配制单体和交联剂溶液。

• 倒胶：

• 倒入水平或垂直电泳槽中，插入加样梳，待凝胶完全凝固后移除加样梳形成样品槽。

3. 检查设备

• 检查电泳槽、电源线是否连接正常。

• 确保电泳槽干净，避免上次实验残留物影响结果。

二、电泳操作步骤

1. 凝胶装载

• 将已凝固的凝胶固定在电泳槽中。

• 加入适量缓冲液，确保凝胶完全浸没。

2. 加载样品

• 使用移液器吸取混合好的样品，缓慢注入凝胶加样槽中。

• 注意：

• 避免气泡形成，以免影响分离效果。

• 每个样品槽装入相等体积的样品。

3. 设置电泳参数

• 电压：根据分子类型和实验目标设置合适电压。

• 核酸电泳：50-150 V（常规琼脂糖凝胶）。

• 蛋白质电泳：80-200 V（SDS-PAGE）。

• 电泳时间：根据染料迁移情况决定，一般为30-90分钟。

4. 启动电泳

• 接通电源，检查电场方向是否正确（样品向正极方向迁移）。

• 启动电泳仪并观察染料迁移情况。

5. 结束电泳

• 电泳完成后，关闭电源，取出凝胶。

• 小心切断电源，防止触电。

三、电泳结果检测

1. 染色与脱色

• 核酸电泳：

• 将凝胶放入染色液（如EB或SYBR Green）中，染色10-30分钟。

• 用去离子水漂洗除去多余染料。

• 蛋白质电泳：

• 放入考马斯亮蓝染色液中，染色30分钟。

• 用脱色液（甲醇和乙酸混合液）脱色，直至条带清晰可见。

2. 成像检测

• 将染色后的凝胶放入检测设备中，如紫外凝胶成像系统（核酸）或普通光学仪器（蛋白质）。

• 记录电泳条带位置和亮度，以便后续分析。

四、注意事项

1. 安全操作

• 使用染料时佩戴手套，避免直接接触（如EB具有毒性）。

• 电泳过程中禁止触摸电泳槽，防止触电。

• 染色和脱色操作应在通风柜内进行。

2. 样品准备

• 样品浓度应适中，避免因过高或过低影响分辨率。

• 加样缓冲液能帮助样品沉底并提供可视化指示，请确保加入量足够。

3. 设备检查

• 定期检查电泳槽是否漏液，电源连接是否稳固。

• 使用后及时清洁设备，避免残留物污染。

4. 电泳条件优化

• 根据分子大小调整介质浓度：

• 小分子核酸：使用高浓度琼脂糖（2%-3%）。

• 大分子核酸：使用低浓度琼脂糖（0.7%-1%）。

• 蛋白质：调整聚丙烯酰胺浓度（6%-15%）。

• 电压过高可能导致凝胶过热，需控制电压以防止样品扩散。

五、电泳仪的常见问题与解决方法

1. 条带弥散

• 原因：电压过高或样品浓度过低。

• 解决方法：降低电压或提高样品浓度。

2. 条带弯曲

• 原因：凝胶制备不均匀或样品未正确加载。

• 解决方法：确保凝胶均匀并调整加样技巧。

3. 条带位置异常

• 原因：电场方向错误或缓冲液不足。

• 解决方法：检查电场极性和缓冲液量。

4. 样品未迁移

• 原因：电源未通电或样品过大。

• 解决方法：检查设备连接，调整电压或介质浓度。

总结

电泳仪是一种功能强大的分离和分析工具，其操作涉及凝胶制备、样品加载、电泳运行和结果检测等多个步骤。掌握正确的操作方法和注意事项，能够确保实验结果的准确性并延长设备的使用寿命。通过优化电泳条件和维护设备，电泳仪将为核酸、蛋白质等分子的分离研究提供高效支持。