使用Thermo酶标仪软件(如Thermo SkanIt 软件)时,操作步骤一般包括实验准备、软件设置、样本检测和数据分析。以下是详细操作步骤:
1. 准备阶段
启动设备与软件
打开酶标仪电源,并确保连接电脑。
启动 SkanIt 软件 或其他配套软件,等待仪器初始化完成。
确保光学滤光片已安装正确(如检测ELISA常用的450nm和630nm滤光片)。
样品准备
准备微孔板(如96孔或384孔),根据实验需求加入样品、标准品和试剂。
避免产生气泡,确保每孔液体体积一致。
根据实验需求,可选择使用孵育功能(如需恒温反应)。
2. 实验设置步骤
创建新实验
吸光度模式:常规ELISA、蛋白定量。
动力学模式:实时监测反应曲线。
光谱扫描模式:样品全波长扫描分析。
打开软件,点击“新建实验”或选择“实验模板”。
根据实验类型选择检测模式:
设置实验参数
如果仪器带有孵育器,设置温度范围(如37°C)和时间。
可选择线性震荡或圆周震荡模式,并设置震荡时间。
单波长检测:输入所需主波长(如450 nm)。
双波长检测:输入主波长(如450 nm)和参比波长(如630 nm),用于消除背景干扰。
检测波长:
检测板型:
震荡设置(选配):
温控设置(选配):
孔板布局
样品孔(Samples):放置待测样品。
空白孔(Blanks):用于校准吸光度。
标准孔(Standards):输入已知浓度的标准品。
对照孔(Controls):添加阳性或阴性对照。
在软件中设置孔板布局(Plate Layout):
软件通常以图示方式显示孔板布局,便于操作。
3. 样本检测步骤
加载样品板
将准备好的微孔板放入酶标仪托盘中。
确保方向正确(一般有标识角,如A1在左上角)。
启动检测
在软件中点击“开始检测”或“运行实验”。
酶标仪开始按照设定的波长、模式和参数自动检测。
如果需要孵育,系统会在检测前或检测中根据设定完成孵育步骤。
在实验运行过程中,软件实时显示吸光度数据或动力学曲线。
可随时暂停检测,调整设置后继续运行。
4. 数据分析与保存
查看数据
空白孔的OD值应接近0。
标准孔的OD值应呈梯度分布。
检测完成后,软件会显示每个孔的吸光度值(OD值)。
确认空白孔和标准孔的吸光度值是否正常:
数据分析
如果是动力学模式,软件会生成反应曲线,分析反应速度和最大吸光度值。
根据标准曲线,软件自动计算样品的浓度或其他分析结果。
软件会根据标准孔的吸光度值,自动生成标准曲线(如线性回归或四参数拟合)。
标准曲线绘制:
样品浓度计算:
动力学分析:
数据导出
点击“导出数据”,选择文件格式(如Excel、PDF)。
保存数据以备实验记录或进一步分析。
生成实验报告
软件支持自动生成报告,包括实验设置、孔板布局、检测数据、标准曲线等。
报告可直接保存为PDF或打印输出。
5. 实验结束与维护
清理设备
取出微孔板,清理托盘,避免液体残留。
如果样品泄漏或托盘污染,用无尘布和温和清洁剂擦拭托盘和光学窗口。
关闭软件与设备
保存所有实验数据和模板。
关闭软件和酶标仪电源,确保设备处于待机状态。
定期维护
每周检查光学窗口是否干净。
定期校准仪器(特别是波长和吸光度范围)。
更新 SkanIt 软件至最新版本,以确保最佳性能。
注意事项
样品准备:
加样前确保试剂均匀混合,避免液体气泡影响检测。
使用相同类型的微孔板,以确保检测结果一致性。
仪器保护:
避免液体溢出,污染仪器托盘和内部光学系统。
长时间不使用时,覆盖防尘罩保护设备。
实验设置:
确保波长设置正确,特别是在双波长模式下,参比波长要与实验类型匹配。
总结
Thermo酶标仪配套的 SkanIt 软件操作简便,功能强大,从实验设置到数据分析都可以实现高效、精准的自动化操作。通过正确使用软件,您可以快速完成各种ELISA、动力学和光谱扫描实验,同时生成标准化的实验报告。根据实际需求选择震荡和孵育功能,可进一步提升实验效率和结果的可靠性。
如果需要更详细的指导或解决问题,请参考仪器操作手册或联系赛默飞官方技术支持团队。