使用赛默飞 Multiskan FC 酶标仪进行标准曲线设置和分析是常见的实验需求，尤其在 ELISA 检测、蛋白定量和酶活性测定等实验中。以下为详细的标准曲线设置步骤，帮助您高效完成实验分析。
一、操作前的准备工作
样品和试剂准备：
准备不同浓度的标准品（通常进行梯度稀释）。
每个浓度设置至少两个重复孔，确保数据的准确性。
根据实验需求准备对照组或空白孔。
酶标板准备：
使用适合实验的96孔微孔板。
按照实验方案将标准品、样品和空白对照分配到对应孔内。
仪器准备：
打开 Multiskan FC 酶标仪，连接计算机并启动配套软件（如 SkanIt™ 软件）。
确保酶标仪内已校准，波长过滤片正确安装。
二、标准曲线设置步骤
1. 启动软件并创建实验方案
打开 SkanIt™ 软件，点击 “新建实验”。
选择所使用的孔板类型（96孔板或其他类型）。
在检测类型中选择 吸光度模式（Absorbance）。
2. 设置波长参数
在实验参数设置中，选择实验所需的检测波长（如：
450 nm（常用于 ELISA）。
570 nm 或 595 nm（常用于蛋白定量，如 BCA 或 Bradford 法）。
如果需要双波长检测，则设置参考波长（如 450 nm 和 620 nm）。
3. 配置标准曲线孔板布局
在孔板布局界面中：
指定标准品的位置（设置从高浓度到低浓度）。
将样品和空白孔标记到相应位置。
可以选择 复制功能 批量标记相同类型的孔。
4. 输入标准品浓度
在 标准曲线设置 页面，输入每组标准品对应的浓度值。
建议使用常规梯度稀释（如 1:2、1:4 或 1:10）生成多个浓度点。
5. 设置测量参数
选择测量类型：
单点测量：检测终点吸光度值。
动力学测量：适合酶活性实验，检测吸光度随时间的变化。
如果需要孵育，设置孵育温度和时间（适用加热模块的情况下）。
6. 运行实验
确保样品和标准品已正确加样，将96孔板放入酶标仪中。
点击 “运行实验”，仪器会自动读取吸光度并生成数据。
三、标准曲线生成与分析
1. 绘制标准曲线
实验完成后，软件会根据输入的标准品浓度和检测吸光度值自动绘制标准曲线。
常见的拟合模型：
线性拟合：适用于吸光度与浓度呈线性关系的实验。
二次曲线拟合：适用于吸光度与浓度为非线性关系的实验。
4参数或5参数拟合：常用于ELISA实验，适应更复杂的数据分布。
2. 分析样品浓度
软件会根据标准曲线自动计算未知样品的浓度。
检查样品数据是否在标准曲线的范围内。如果超出范围，建议重新稀释样品并重复实验。
3. 数据导出
点击 “导出数据”，将实验结果以 Excel 或 PDF 格式保存。
可选择包含标准曲线、样品浓度和孔板布局在内的完整报告。
四、常见问题及解决方法
标准曲线不线性：
检查标准品的稀释是否均匀。
确保样品和标准品吸光度值未超过仪器检测范围（0-4.0 OD）。
如果数据偏离线性范围，尝试更换拟合模型。
空白孔吸光度偏高：
检查酶标板是否清洁。
确保试剂和溶液无污染。
样品浓度超出标准曲线范围：
对样品进行稀释后重新检测。
数据重复性差：
确保每个样品和标准品加样量一致。
检查酶标板和仪器是否处于水平状态。
五、设置标准曲线的操作总结
在 SkanIt™ 软件中，设置波长参数并分配孔板布局。
输入标准品浓度，选择合适的拟合模型（如线性或4参数拟合）。
运行实验并根据标准曲线计算样品浓度。
导出实验数据并保存完整的实验报告。
六、Thermo Multiskan FC 的优势
精准检测：宽波长范围（200-1000nm）支持多种实验需求。
高效操作：软件自动生成标准曲线和样品浓度，节省分析时间。
易用性强：直观的孔板布局和数据导出功能，适合初学者和资深研究者。
如需详细的设置教程或软件使用说明，建议参考仪器的用户手册，或联系赛默飞官方技术支持获取进一步帮助。
